在我们体内，成千上万的基因每天都在努力工作，确保细胞和器官的正常运作。然而，有趣的是，虽然我们体内的基因数量有限，但它们可以通过一种叫做“可变剪切”的机制，生成数量更多、功能更广泛的蛋白质。这就像一部剧本可以有多个版本，通过改变场景顺序或对话来产生不同的故事情节。
什么是可变剪切？
要理解可变剪切，我们首先需要了解基因的基本构造。基因是DNA中的一段序列，它指示细胞如何制造蛋白质。在基因表达的过程中，DNA被转录成mRNA，而mRNA则是细胞生产蛋白质的蓝图。然而，这个过程并不是简单的“从头到尾”的复制，而是经过了一些“编辑”步骤。
在基因的mRNA中，有两种片段：外显子和内含子。外显子是编码蛋白质的片段，而内含子则是需要被去除的“无用”片段。通常情况下，mRNA在被翻译成蛋白质之前，内含子会被剪掉，外显子拼接在一起。但在可变剪切中，这个拼接过程可以产生不同的组合方式。
可变剪切的多样性
想象一下，一本书的章节（外显子）可以根据需要重新排序或选择性地跳过一些章节。这样一来，虽然基因的DNA序列没有变化，但通过不同的剪切方式，细胞可以从同一个基因产生多种不同的蛋白质。这就是可变剪切的神奇之处！
举个简单的例子：
假设一个基因有三个外显子：A、B、C。通过可变剪切，这个基因可以产生以下几种mRNA：
- A-B-C
- A-C
- B-C
这些不同的mRNA可以翻译成不同的蛋白质，执行不同的功能。
MISO（Mixture of Isoforms）是一款用于识别可变剪接事件的软件。需要注意的是安装MISO需要python2.7环境，这个conda就可以解决。
在安装MISO之前，需要确保系统中安装了以下依赖项：
- Python 2.7
- pip：用于安装Python包。
- NumPy：数值计算库。
- SciPy：科学计算库。
- Matplotlib：绘图库。
可以使用以下命令安装这些依赖项：
sudo apt-get update
sudo apt-get install python2.7 python-pip
pip install numpy scipy matplotlib
3. 安装MISO
MISO的源代码可以从GitHub上获取。首先，克隆MISO的GitHub仓库，然后安装：
git clone https://github.com/yarden/MISO.git
cd MISO
python setup.py install
4. 设置MISO环境变量
安装完成后，需要设置MISO的环境变量，使其能够正常工作。编辑~/.bashrc文件并添加以下内容：
export MISO_PATH=/path/to/MISO
export PATH=$MISO_PATH:$PATH
将/path/to/MISO替换为MISO安装的实际路径。保存并退出编辑器，然后使用以下命令使更改生效：
source ~/.bashrc
5. 测试MISO安装
验证MISO是否正确安装，可以运行以下命令：
miso --help
如果安装成功，将显示MISO的帮助信息。
6. 下载MISO索引
MISO需要预先构建的索引文件，用于处理特定的基因组。如果没有这些文件，可以使用MISO提供的工具构建索引或下载现成的索引文件。
要构建索引，使用以下命令：
index_gff --index gff_directory/ indexed_output/
其中gff_directory/是包含GFF3文件的目录，indexed_output/是索引文件的输出目录。
7. 使用MISO运行分析
安装完成后，可以开始使用MISO进行可变剪接分析。基本的命令如下：
miso --run indexed_output/ your_sample.bam --output-dir output_directory/
其中，your_sample.bam是输入的BAM文件，output_directory/是输出结果的目录。
8. 可视化结果
MISO提供了可视化工具，用于查看分析结果。可以使用以下命令生成可视化图表：
summarize_miso --summarize-samples output_directory/ summarized_output/
然后使用：
plot.py --plot-event your_event summarized_output/ output_plot/
其中，your_event是你感兴趣的剪接事件，output_plot/是生成图表的输出目录。